Eu标记RT-PCR检测丙型肝炎病毒RNA
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R512.63 Q789

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Detection of hepatitis C virus by using a new europium fluorescent chelate as a label
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    摘要:

    目的 采用一种新的铕螯合物BHHCT,制备高灵敏度荧光标记物,建立检测丙型肝炎病毒(HCV)RNA的方法。方法 采用柱层析纯化的方法抽提血清中HCV RNA。以5′端带有生物素的引物进行RT-PCR Tth酶一步法扩增,通过固定于微孔板上的捕获探针与带有生物素的PCR扩增产物杂交后,利用标记有铕的链霉亲合素与生物素的特异性结合,将铕连接到待测核酸上,在特定波长的激光光激发下发出荧光,进行检测。结果 铕标记检测法与酶标法的变异系数、敏感性、特异性分别为10.43%、100%,100%与16.25%,94%,100%。结论 Eu标记RT-PCR Tth酶一步法检测HCV RNA,具有敏感、特异、快速、重复性好、不受环境因素影响和无溴乙锭污染等优点,可望取代酶标法及电泳法。

    Abstract:

    Objective To establish a method which utilize the new europium fluorescent chelate BHHCT as label for highl sensitive detection of hepatitis C virus.Methods HCV RNA extracted by chromatography was one-round amplified by Tth enzyme PT-PCR in which,the primers were pre-labeled with biotin.The amplified products were hybridized with capture probe pre-fixed on the microplate.By conjugation of biotin with europium-labeDNAled streptavidin,Europium was linked to the target DNA,and fluorescent of europium was measured.Results The CV values,sensitivity and specifity of this method were 10.43%,100%,100% respectively,compared with enzyme-labeled assay 16.25%,94%,100%,Conclusion Europium labelled RT-PCR assay is a sensitive,specific,fast and precise method for detection of hepatitis C virus.

    参考文献
    相似文献
    引证文献
引用本文

赵智凝,童明庆,潘世扬,黄珮珺,赵旺胜. Eu标记RT-PCR检测丙型肝炎病毒RNA[J].临床检验杂志,2002,(3):145-147

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