细胞核抗原Sm B''''的基因克隆和原核表达
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R446.6

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福建省青年人才科技创新基金资助项目(2002J060).


Gene cloning and fusion expression of nuclear antigen Sm B'''' in E. Coli
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    目的 为建立抗Sm自身抗体检测方法,自行克隆、表达和鉴定细胞核抗原Sm B’。方法 应用逆转录聚合酶链反应(RT-PCR)技术,从HL-60细胞株中克隆Sm B’全长基因,将PCR产物直接进行TA克隆、鉴定及测序,再定向克隆至pGEX-5T载体中,转入大肠杆菌BL-21,阳性克隆鉴定后在异丙基-β—D-硫代半乳糖苷(IPTG)诱导下表达,产物行十二烷基硫酸钠-聚丙烯酰胺凝胶电泳(SDS-PAGE)和蛋白质印迹法(western blot)鉴定。结果PCR产物约为700 bp,与预期657 bp接近,测序结果与GenBank核酸数据库报道完全一致。pGEX-ST-Sm B’重组阳性克隆酶切鉴定正确,SDS—PAGE和western blot结果显示融合蛋白分子量为51 000,具有与抗Sm B’抗体的反应性。结论成功克隆表达核抗原Sm B’,为建立抗Sm自身抗体检测方法奠定了基础。

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引用本文

杨湘越 兰小鹏 廖剑 钟智强 朱忠勇.细胞核抗原Sm B''''的基因克隆和原核表达[J].临床检验杂志,2006,(3):166-168

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  • 收稿日期:2005-07-18
  • 最后修改日期:2006-01-19
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