摘要：目的：建立检测肠道病毒（EV）、B1型柯萨奇病毒（CVB1）的双重荧光定量RT-PCR法。 方法：用Primer Express 3.0软件设计特异性引物和探针，优化双重荧光定量RT-PCR反应体系，建立标准曲线并评价该法的灵敏度、特异性和重复性，用该法检测150份病毒性心肌炎患儿治疗前肛拭子和29份治疗后粪便标本，并与文献提供的PCR法进行对比。 结果：该法对EV、CVB1型肠道病毒检测具有较高特异性，检出限均为2×10^-2TCID₅₀/mL；具有较好的重复性,CV均＜2.3%；标准曲线的相关系数（r²）分别为0.999和0.997，扩增效率（%）分别为98.809和96.564；179份临床标本用该法检测95份为EV病毒，其中59份为CVB1病毒，与文献提供的PCR法结果符合率为98.88%(P均＞0.05)。 结论: 建立的双重荧光定量RT-PCR法可同时检测并区分EV和CVB1型病毒，适用于病毒性心肌炎临床标本的检测。