摘要:目的 建立一种针对手足口病病原体的快速准确检测方法。 方法 利用TaqMan-LNA探针建立多重荧光定量RT-PCR方法，同时检测肠道病毒71型(EV71)和肠道病毒通用型(EV-U)，用含有目的序列RNA的标准品制备标准曲线，对病毒进行准确定量,同时对该方法的特异性、灵敏度、重复性进行评估。结果 用TaqMan-LNA探针多重荧光RT-PCR法检测CoxA16、CoxB2、EV71病毒和其他人类病毒RNA，证实其特异性为100%；对EV71和EV-U的检测灵敏度均达到10^{2拷贝/μl；将EV71和EV-U的RNA标准品进行重复性实验，其批内、批间变异系数分别为0.97%～2.02%和0.89%～2.13%。 结论 本方法灵敏度较高，特异性强，重复性好，适用于手足口病的临床检测。}

摘要:目的 通过体外联合药敏试验了解治疗耐亚胺培南铜绿假单胞菌感染的最佳联合用药。 方法 耐亚胺培南铜绿假单胞菌30株，以琼脂稀释法测定环丙沙星（CIP）、阿米卡星（AMK）、头孢噻肟（CTX）、左氧氟沙星（LVX）的最低抑菌浓度（MIC），以棋盘肉汤稀释法对CIP与CTX和AMK与CTX进行联合药敏实验。 结果 棋盘肉汤稀释法，CTX与AMK和CIP的协同率分别为80％和43.3％，有效点率分别为73.3％和30％。 结论 对多重耐药铜绿假单胞菌的感染，可使用AMK和CTX进行联合治疗。

摘要:目的 通过检测肠出血型大肠埃希菌O157:H7菌株，确定免疫PCR技术的检测灵敏度和特异性，探讨该方法用于检测食品和临床标本的可行性。 方法 免疫PCR技术检测O157:H7标准菌株和自食品、临床标本分离的菌株。 结果 免疫PCR最少可检测101/ml O157:H7细菌,临床和食品分离的O157:H7菌株检测结果均为阳性，而非O157:H7菌株检测结果均为阴性。 结论 免疫PCR技术具有较高的检测灵敏度、特异性及操作简便等特点，可作为食品和临床标本检测O157:H7方法。

摘要:目的 探讨高半胱氨酸、内皮素-1和C反应蛋白联合检测在2型糖尿病肾病中的临床价值。 方法 将105例2型糖尿病肾病患者按尿清蛋白排泄率分为A、B、C 3组，在Olympus AU2700全自动生化仪上分别检测高半胱氨酸、C反应蛋白，用放射免疫法检测血浆内皮素-1。 结果 各期2型糖尿病肾病患者血清高半胱氨酸、C反应蛋白及血浆内皮素-1水平均明显升高，与健康对照组比较，有显著性差异（P＜0.05或P＜0.01）；105例2型糖尿病肾病患者高半胱氨酸与C反应蛋白、内皮素-1检测值呈正相关（r分别为0.284 5、0.412 2，P＜0.05、P＜0.01）。 结论 高半胱氨酸、内皮素-1和C反应蛋与2型糖尿病肾病的严重程度成正相关，检测3项指标有利于患者肾脏功能损害程度的临床诊治和预后判断。

摘要:目的 探讨烧伤患者血清甘露聚糖结合凝集素（MBL）水平动态变化的意义。 方法 40例患者按烧伤面积＜50%和≥50%分成2组，用ELISA法检测烧伤后1、3、7、15 d血清MBL水平，同时观察患者外周血WBC、中性粒细胞(N)计数作为对照指标。 结果 烧伤面积≥50%患者烧伤后1 d血清MBL水平均明显升高（P＜0.01），伤后3、7 d明显减低但至15 d随伤情好转可回升至正常水平；2例大面积烧伤伴感染，病情反复患者血清MBL水平持续减低，至15 d仍显著低于正常水平（t=2.21，P＜0.05）。2组患者血WBC和N计数则均在烧伤1 d后显著升高，以后逐步下降。 结论 动态测定烧伤患者MBL水平有助于评估烧伤患者抗感染能力及病情转归。

摘要:目的 分别测定正常人和胃癌及胃癌患者手术前后血清胃蛋白酶原Ⅰ（PGⅠ）、PGⅡ及PGⅠ/PGⅡ(PGR)，以了解对胃癌诊断的临床价值。 方法 用乳胶增强免疫比浊法检测60例健康人，70例胃溃疡患者，52例胃癌手术前患者血清胃蛋白酶原的含量。 结果 胃溃疡患者与对照组相比血清PG含量无显著性变化；而胃癌患者与对照相比血清PGⅠ显著性下降（t=6.74,P<0.01）, PGⅡ差异无显著性（t=0.209,P>0.05），PGR显著性下降（t=3.036,P<0.01）。胃癌患者手术后与术前比较PGⅠ显著性下降（t=14.61,P<0.01）, PGⅡ显著性下降（t=8.15,P<0.01），PGR无显著性差异（t=0.81,P>0.05）。 结论 血清PGⅠ、PGⅡ及PGR对胃癌的诊断及预后判断具有重要的临床意义。

摘要:目的 研究慢性阻塞性肺疾病急性加重期（AECOPD）患者血清羟基端糖肽（copeptin）测定的临床意义。 方法 以36例AECOPD患者和16名健康对照者为研究对象，测定患者治疗前、后及对照组的血清copeptin、血常规、CRP、PaO2、PaCO2及氧合指数（PaO2/FiO2），比较2组相关数值的差异，AECOPD患者治疗前血清copeptin与CRP、外周血WBC总数、PaO2、PaCO2及PaO2/FiO2的相关性。 结果 治疗前AECOPD患者血清copeptin、CRP、WBC及PaCO2均明显高于对照组，PaO2、PaO2/FiO2均明显低于对照组，P均<0.01；AECOPD患者治疗后血清copeptin、CRP、WBC及PaCO2均明显低于治疗前，PaO2、PaO2/FiO2均明显高于治疗前，P均<0.01；AECOPD患者治疗前血清copeptin与CRP、WBC及PaCO2呈正相关（P均<0.01），与PaO2、PaO2/FiO2呈负相关（P均<0.01）。 结论 血清copeptin可作为判断AECOPD患者治疗疗效的一种炎症指标。

摘要:目的 探讨胸苷激酶1（TK1）和多种恶性肿瘤相关物质（TSGF）能否作为肿瘤标志物。 方法 应用免疫印迹增强化学发光法和TSGF检测试剂盒分别检测137例肿瘤患者、103例非肿瘤疾病患者和280例健康体检者血清中TK1与TSGF水平，并评价其敏感性、特异性、可用度、阳性预测值、阴性预测值和Youden指数。 结果 肿瘤患者组TK1和TSGF阳性率虽均显著高于非肿瘤疾病组和健康体检组，但敏感性仅分别为35.0%和27.0%，特异性分别为94.0%和97.1%，可用度分别为41.9%和42.6%，阳性预测值分别为67.6%和77.1%，阴性预测值分别为80.2%和78.8%，Youden指数分别为0.29和0.24。 结论 在已确诊的恶性肿瘤患者中，TK1和TSGF的阳性率很低，可用度均＜43%，有65%~73%的患者会漏诊，不适宜作为检测肿瘤的指标。

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摘要:目的 分离纯化人骨髓间质干细胞（MSCs）来源的外体（exosome），并鉴定其生物学特性。 方法 收集人骨髓MSCs培养上清，采用超滤及梯度离心法分离并纯化exosome，通过透射电镜观察其形态，SDS-PAGE电泳初步分析exosome蛋白质组成，western blot检测exosome包含的相关蛋白质，用流式细胞术检测其表面标志CD44、CD29等。 结果 骨髓来源的MSCs能够分泌exosome，电镜下呈椭圆或碟状的囊泡结构，直径约40~100 nm。exosome内含多种蛋白质成分，具有MSCs膜脂质成分，能与PKH26脂质染料结合，并表达MSCs表面黏附分子CD44、CD29。 结论 人骨髓MSCs能够分泌exosome，采用超滤及梯度离心法可以成功从MSCs培养上清中分离纯化exosome，MSCs分泌的exosome具有MSCs的胞膜及胞质蛋白组分。本研究可为进一步开展人骨髓MSCs来源exosome的生物学特性及其在组织损伤修复中的作用和机制研究提供实验基础。

摘要:目的 制备兔抗人分化抑制因子3（Id3）多克隆抗体，建立检测血清Id3的双抗体夹心ELISA技术。 方法 用纯化的Id3重组蛋白免疫新西兰大白兔，制备兔抗Id3多克隆抗体，通过多肽亲和层析柱去除非特异性成分，免疫细胞化学染色、免疫双向扩散及间接ELISA法检测抗体特异性和效价。制备辣根过氧化物酶（HRP）标记抗Id3，以纯化Id3重组蛋白为标准抗原制备标准曲线，建立定量检测人Id3的双抗体夹心ELISA法。 结果 免疫细胞化学染色显示，制备的兔抗血清能与人Id3蛋白特异性结合，所得兔抗血清效价分别为1 ∶ 8（琼脂双向扩散）和1 ∶ 8 000（ELISA）。ELISA法的包被抗体和酶标记抗体的工作浓度分别为5 μg/ml和1 ∶ 4 000，标准曲线为Y= 0.079 3+0.018 8X，r=0.997。检测线性范围为2～64 U/ml，平均回收率为98.2%, 批内平均变异系数（CV）为4.4%, 批间平均CV为7.2%。该方法可用于人血清Id3含量的检测。 结论 兔抗人Id3多克隆抗体的制备及夹心ELISA法的建立为今后研究Id3蛋白的功能及其在临床和基础医学中的应用奠定了基础。

摘要:目的 制备具有高免疫原性的白念珠菌重组烯醇化酶蛋白质。 方法 以白念珠菌C1标准株基因组DNA作为模板，用PCR法扩增烯醇化酶的全长DNA序列，以pET28a(+)为载体，构建重组表达质粒，转化大肠埃希菌BL21(DE3)，IPTG诱导重组融合蛋白质表达。用抗his标签的单克隆抗体和白念珠菌抗体阳性的病人血清进行western blot鉴定，亲和层析柱纯化重组蛋白质。 结果 获得了含白念珠菌烯醇化酶全长基因的重组表达载体和相应工程菌株，经IPTG诱导后能高效表达重组融合蛋白质。经已含抗体的病人血清进行western blot鉴定，表明诱导的重组蛋白质有良好的免疫原性。 结论 成功克隆了白念珠菌烯醇化酶全长基因并在大肠埃希菌中获得高效表达；重组蛋白质具有良好的免疫原性。

摘要:目的 探讨HBV核心蛋白（HBc）对α干扰素（IFN-α）抗病毒活性可能存在的拮抗机制。 方法 以表达抗黏液病毒A蛋白(MxA)的重组质粒pcDNA3.1-Flag-MxA （野生型）转染肝胚瘤细胞株HepG2.2.15细胞，用ELISA和real-time PCR法分别检测转染后HepG2.2.15细胞上清HBsAg、HBeAg和细胞外HBV DNA。HBc核心蛋白表达质粒（pHBc-EGFP）转染HepG2细胞后，RT-PCR法分析IFN-α抗病毒蛋白MxA、双链RNA激活的蛋白激酶（PKR）和2′,5′-寡腺苷酸合成酶（2′,5′-OAS）等mRNA水平。结果 转染MxA重组质粒的HepG2.2.15细胞能够表达MxA，转染48 h时HBsAg、HBeAg比空白对照组显著减少（P＜0.05），HBV DNA无显著性差异。转染pHBc-EGFP的HepG2细胞，经1 000 IU/ml IFN-α处理后，抗病毒蛋白PKR和2′,5′-OAS mRNA水平未见明显改变，而MxA-mRNA水平显著降低（P＜0.05）。 结论 HBV核心蛋白可能通过抑制抗病毒蛋白MxA的表达，而发挥对IFN-α的拮抗作用。

摘要:目的 构建cap10基因RNA干扰(RNAi)的小干扰RNA（siRNA）表达载体，为将其应用于隐球菌的改造及隐球菌性脑膜炎的生物治疗奠定基础。 方法 根据GenBank发表的cap10基因序列，按照干扰模板设计原则，选择设计1条可形成发夹结构的核苷酸序列，克隆连接到空载体psilencer 4.1-CMV neo中构建重组质粒ps 4.1 neo-cap-10并测序鉴定。用LiAc化学法将重组质粒转染新生隐球菌细胞并用G418筛选。比较重组质粒转染前后新生隐球菌cap10基因表达量的变化。 结果 成功构建针对cap10基因的ps 4.1 neo-cap10,经测序证实符合预期设计；ps 4.1 neo-cap10转染组新生隐球菌内cap10基因表达（175 534.6±47 004.3）copies/μl明显低于空质粒转染组（321 995.5±32 611.8）copies/μl和空白组（562 931.7±65 928.4）copies/μl，P＜0.05。 结论 成功构建cap10基因的shRNA表达载体,其可以明显抑制新生隐球菌细胞内cap10基因的表达。

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摘要:目的 观察过表达Apg-2对H2O2所致BaF3-BCR/ABL细胞损伤的保护作用。 方法 以H2O2作用于逆转录病毒空载体MIGR1感染细胞株BaF3-MIGR1和稳定表达BCR/ABL的BaF3-BCR/ABL细胞为氧化应激损伤模型，RT-PCR检测H2O2作用前后Apg-2基因表达水平；用紫外分光光度法测定乳酸脱氢酶(LDH)释放率，观察细胞的损伤程度；硫代巴比妥酸法测定丙二醛(MDA)含量，黄嘌呤氧化酶法测定过氧化物歧化酶(SOD)活性；Am-blue法检测细胞存活率。 结果 过表达Apg-2能明显改善H2O2导致的BaF3-BCR/ABL细胞损伤，与BaF3-MIGR1细胞处理组相比，过表达Apg-2可使BaF3-BCR/ABL细胞存活率升高，LDH释放率明显降低，降低MDA含量，提高SOD活性。 结论 过表达Apg-2对H2O2诱导的BaF3-BCR/ABL细胞损伤具有明显的保护作用。

摘要:目的 评价血清基质金属蛋白酶-2（MMP-2）及其组织抑制因子-1（TIMP-1）与糖尿病足慢性溃疡的关系及两指标的相关性。 方法 ELISA法测定糖尿病足（DF组）患者78例、2型糖尿病（T2DM）非糖尿病足（NDF组）患者111例和健康体检者（CON组）150例血清MMP-2、TIMP-1水平。 结果 CON、NDF和DF三组血清MMP2水平依次升高，差异有统计学意义（P<0.05）；DF、NDF组血清TIMP-1水平均低于CON组（P<0.05），DF、NDF组间差异无统计学意义；DF组MMP-2/TIMP-1的比值高于NDF和CON组，NDF与CON组间差异无统计学意义。血清TIMP-1与MMP-2呈高度负相关（r=-0.852，P<0.05）。Logistic回归分析示,MMP-2是DF的独立危险因素。 结论 血清MMP-2升高是糖尿病患者发生DF的独立危险因素，与TIMP-1负相关。糖尿病患者血清MMP-2水平升高对于预测DF发生有一定价值。

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摘要:目的 研究转录因子Oct 4在胃肠道肿瘤中的表达及其意义。 方法 取35例胃肠道肿瘤患者肿瘤组织和瘤旁组织标本，用RT-PCR和real-time PCR检测Oct 4在各标本中的表达情况，并分析其表达水平与临床资料的相关性。 结果 Oct 4的表达阳性率在35例胃肠道肿瘤组织中为77.1%（27/35），明显高于瘤旁组织8.6%（3/35），P<0.01；Oct 4的表达水平与肿瘤的分化程度有关，低分化肿瘤较中、高分化肿瘤高，P<0.01；与患者年龄、性别、肿瘤是否浸润及有无淋巴结转移无关（P均>0.05）。 结论 Oct 4表达水平与胃肠道肿瘤分化程度呈负相关，可成为胃肠道肿瘤诊治和预后的一种新的肿瘤标志物。

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摘要:目的 探索测量不确定度评定在临床检验常规测量中的应用。 方法 以总胆固醇（TC）常规测量为例，按测量不确定度评定过程，分析不确定度分量的来源并分别按A类和B类进行评定；根据针对单一样本和针对受试者的方案合成标准不确定度，计算扩展不确定度。 结果 不确定度分量来源包括：不精密度、人体生理变异、校准品、偏倚。其中，不精密度分量按CLSI EP5A文件评定，分别为1.67% (TC=4.25 mmol/L)和2.46%(TC=6.79 mmol/L)；参照文献，TC生理变异的不确定度分量为6.0%；根据厂家的溯源性报告，校准品的不确定度分量为0.4%；根据卫生部室间质评回报结果，偏倚所致的不确定度分量为2.03% (TC=3.52 mmol/L)和0.45%(TC=6.74 mmol/L)。经合成，针对单一样本的扩展不确定度为（4.25±0.22） mmol/L(κ=2)、(6.79±0.34) mmol/L(κ=2)；针对受试者的扩展不确定度为（4.25±0.56） mmol/L(κ=2)、（6.79±0.88） mmol/L(κ=2)。 结论 临床检验常规测量中应根据具体情况分析不确定度分量的来源，用不同的方案合成标准不确定度。

摘要:目的 制定合理的自动血细胞分析复检规则并对其进行评价。 方法 在国际血液学41条复检规则的基础上，利用Sysmex XT-1800i的报警系统，自定复检规则。对2 182例门诊和住院病人的标本进行全自动血细胞分析并同时涂片镜检，观察细胞数量和形态学变化。比较二者的结果，对各条自定复检规则进行统计学分析。 结果 各自定规则中假阳性率最高的是未成熟粒细胞，其次是原始细胞、异型淋巴细胞和有核红细胞。真阳性率最高的是白细胞异常散射图。自定复检规则形态学评估真阳性率18.15%，假阳性率9.81%，真阴性率69.98%，假阴性率2.06%，复检率27.96%。对规则8 进行修改后假阳性率下降至6.14%，复检率为24.29%。验证结果显示，血液病理细胞无漏检现象。 讨论 合理适用的血细胞分析复检规则可以提高真阳性率，降低假阴性率，既可保证工作质量又可提高工作效率。

摘要:

摘要:目的 验证部分商品定量试剂盒的主要分析性能。 方法 根据我国卫生部“医疗机构临床实验室管理办法”和CLSI指南文件EP6的要求，对部分商品定量试剂盒进行精密度、正确度和可报告范围的验证试验。 结果 各商品定量试剂盒的批内、批间精密度CV值分别为0.51%～3.20%、0.61%～4.80%均小于厂家CV值；正确度试验结果的平均偏倚值（0.40%～5.36%）均低于厂家偏倚值及CLIA′88规定的允许误差的1/2；各项目的可报告范围试验测定值结果与预测值接近，相关系数r＞0.975，线性理想（斜率b接近1）。 结论 本研究验证的商品定量试剂盒的精密度、正确度和可报告范围3方面均达到了临床应用的实验要求。

摘要:目的 评价淋病奈瑟菌（淋球菌）药物敏感性试验方法及了解药敏纸片的质量，为性病实验室选用药敏方法及药敏纸片提供参考依据。 方法 以琼脂稀释法作金标准，用纸片扩散法对5种常用国产及进口药敏纸片进行药敏试验，并将结果与金标准比对，同时比较药敏纸片的质量。 结果 纸片扩散法与琼脂稀释法的符合率：环丙沙星、大观霉素及质粒介导高度耐四环素淋球菌（TRNG）符合率均为100%，而头孢曲松符合率为 96.67%。国产药敏纸片及进口药敏纸片中环丙沙星、大观霉素、头孢曲松及四环素的符合率均为100%；而青霉素符合率为73.33%。 结论 CLSI推荐的淋球菌抗生素敏感试验琼脂稀释法和纸片扩散法检测头孢曲松药物结果存在差异,应引起重视。国产药敏纸片环丙沙星、大观霉素、头孢曲松、四环素可代替进口抗生素，而青霉素药敏纸片质量有待进一步探讨。

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摘要:目的 了解本院多药耐药鲍曼不动杆菌产OXA酶情况、基因同源性及传播机制,为临床防治提供依据。 方法 采用琼脂稀释法检测鲍曼不动杆菌的最低抑菌浓度(MIC),改良Hodge试验检测碳青霉烯酶， PCR进行OXA酶的基因分型，并对PCR产物进行测序；ERIC-PCR分析鲍曼不动杆菌基因同源性，转移接合试验进行基因定位。 结果 45株菌耐药情况较严重；在42株耐碳青霉烯类鲍曼不动杆菌中，表型和基因型检测显示产OXA酶34株；ISAba1-bla_OXA-23阳性39株，bla_OXA-23阳性3株;42株菌bla_OXA-23均位于染色体。bla_OXA-58阳性3株，2株bla_OXA-58位于染色体，1株bla_OXA-58位于质粒上。42株bla_OXA-23阳性鲍曼不动杆菌属于6种分型(A、B、C、D、E、F)，其中A型34株，B型4株，A、B两型间具有亲缘关系。 结论 本组多药耐药鲍曼不动杆菌对碳青霉烯类耐药主要是产OXA-23酶,携带bla_OXA-23鲍曼不动杆菌存在医院内克隆传播。

摘要:目的 研究甲型H1N1流感患者经治疗后淋巴细胞亚群数量与比例的变化,探讨病毒对机体免疫系统的影响。 方法 LH750血液分析仪及FACScalibur流式细胞仪测定患者治疗前后外周血淋巴细胞和CD3⁺、CD4⁺、CD8⁺T淋巴细胞绝对数与比例（%）。 结果 H1N1 病毒感染后血液中淋巴细胞,CD3⁺、CD4⁺、CD8⁺T细胞数量下降,治愈后恢复正常(P<0.01)。 结论 H1N1病毒感染后淋巴细胞减少可能与甲型H1N1流感发病机制有关。

摘要:目的 检测和分析结核分枝杆菌（MTB）的耐药性，为临床诊断与治疗提供实验依据。 方法 分离我院门诊及住院肺结核患者痰标本中MTB并进行异烟肼、利福平、链霉素和乙胺丁醇4种抗结核一线药物的敏感试验。 结果 90例肺结核患者（初治60例，复治30例）以青壮年为主（76.7%）； 在所有病例中，分离的MTB对4种抗结核药物均敏感的41例，存在不同类别耐药的49例，总耐药率54.4%。其中，单耐药在初治病例中多见，耐多药以复治病人为主，多耐药在初治与复治病人中比例相当。 结论 应加强结核病患者痰MTB的检测，根据药敏结果分层次制定不同方案，以提高治愈率，减少耐药结核病尤其是耐多药结核病例的产生。

摘要:目的 了解新疆地区鲍曼不动杆菌（ABA）16S rRNA甲基化酶基因及qacE△1-sul1基因存在状况。 方法 对临床分离的40株ABA用PCR法检测16S rRNA甲基化酶基因及qacE△1-sul1耐药基因并与基因库比对。 结果 40株MDR-ABA 6种16S rRNA甲基化酶基因检出结果与美国GenBank登录的相同；40株ABA菌中qacE△1-sul1耐药基因阳性21株（52.5%）。 结论 本组40株ABA未检出16S rRNA基因甲基化酶基因，qacE△1-sul1基因检测结果提示这些菌株52.5%携带Ⅰ类整合子，是本组细菌多重耐药表型的原因之一。

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