摘要:摘要:目的：建立一种五重荧光定量RT-PCR 检测并鉴别流感病毒A(Flu A)及血凝素H3、H5、H7基因亚型的方法。 方法：以人细胞核糖核酸酶P(RNase P)基因为内参照，用Primer Express 3.0软件设计PCR特异性引物和探针。构建质粒标准品用于分析该方法的灵敏度和重复性，利用不同来源的呼吸道病毒样本进行特异性分析。 结果：该法检测Flu A、H3、 H5、H7以及RNase P质粒标准品的灵敏度均达10² copies/mL，特异性达100%，各对引物和探针仅检测出相应的病毒，未有交叉反应，变异系数（CV）≤1.99%。 结论：建立的五重荧光定量RT-PCR法灵敏度、特异性高，重复性好，可用于检测出多种甲型流感亚型，对甲型流感病毒不同亚型早期诊断具有一定的价值。

摘要:摘要：目的：建立检测烟曲霉硫氧还蛋白还原酶GliT（thioredoxin reductase GliT，TR）的双抗体夹心ELISA法，并用于几种真菌培养上清液中TR蛋白的检测。 方法：纯化鼠抗人TR单克隆抗体并进行辣根过氧化物酶（HRP）标记。以纯化羊抗TR多克隆抗体为包被抗体，HRP标记鼠抗人TR单克隆抗体为检测抗体，建立双抗体夹心ELISA法。用方阵滴定法确定包被抗体和检测抗体的最适浓度；对方法的精密度、特异性和最低检测限进行评价；比较分析其检测3种常见曲霉（烟曲霉、黄曲霉、黑曲霉）培养上清中天然TR蛋白的能力，并与3种常见假丝酵母菌（白假丝酵母菌、热带假丝酵母菌、光滑假丝酵母菌）作比较。 结果：方阵滴定的结果显示最适包被抗体浓度为1 μg/mL，最适检测抗体的稀释度为1∶3 000。抗原最低检测限达2.25 ng/mL。重组TR浓度为5 ng/mL和20 ng/mL时，批内和批间变异系数分别为8.57%、12.69%和6.73%、10.45%。阻断实验显示该法有较好的特异性，阻断率达84.7%。该法可以检出烟曲霉24 h培养上清中的天然TR，TR含量与烟曲霉菌丝含量呈正相关。本法与另2种曲霉和3种假丝酵母菌培养上清无交叉反应。 结论：成功建立并优化了检测烟曲霉TR抗原的ELISA法。该法具有良好的精密度及特异性，对烟曲霉感染有潜在的诊断价值。

摘要:摘要:目的：建立基于PCR反向斑点杂交技术（PCR-RDB）的32型生殖道人乳头瘤病毒（HPV）基因分型方法。 方法：设计并合成基于MY09/11的HPV型特异性引物和探针；以HPV载体和临床样本为模板，用自建的PCR-RDB法对300例临床宫颈脱落细胞进行HPV分型检测，并与商品化的PCR-RDB法检测结果进行比较。 结果：自建的PCR-RDB法的特异性、准确性和重复性良好，其对39和51型HPV的最低检测限为50拷贝/反应，其余各型别HPV最低检测限为5拷贝/反应。用自建的PCR-RDB法对300例临床样本进行HPV分型的总阳性率、单一感染率和多重感染率分别为18.67%（56/300）、12.33%（37/300）、6.33%（19/300），与商品化试剂的检测结果均无统计学意义（χ²分别为0.744，0.597和0.118，P均＞0.05）。两法一致性检验的Kappa值为0.889（P<0.01）。 结论：成功建立了灵敏度、特异性高，重复性良好，适合临床上对32型HPV分型的PCR-RDB法。

摘要:摘要：目的：基于Luminex流式液相芯片技术建立一种对水痘-带状疱疹病毒（VZV）进行快速高通量检测分型的新方法。 方法：根据国际标准系统发育树分型（Clade 1-5），对GenBank上各VZV毒株进行比对分析，设计针对VZV各亚型的特异性引物和探针，通过荧光编码微球建立VZV快速检测及分型系统，并分析该系统检测灵敏度及特异性。利用该系统检测19例临床水痘及25例带状疱疹患者疱疹液标本的VZV分型。 结果：建立的流式液相芯片VZV检测及分型系统能特异检出Clade 1-5型样本，各型VZV最低检出限为10²拷贝/反应，对其他型别VZV及人基因组样本检测为阴性。19例水痘患者样本中，阳性率为94.7%（18/19），其中Clade 2型17例，Clade 1型1例；25例带状疱疹患者标本阳性率为80%（20/25），全部为Clade 2型。 结论：利用流式液相芯片技术建立的VZV 检测分型系统具有快速、高通量、高灵敏度和特异度的特点，可以用于临床VZV感染的诊断及流行病学调查。

摘要:摘要：目的：探讨不同温育模式对ADDCARE全自动酶免分析仪上部分检测项目检测结果的影响。 方法：在全自动酶免分析仪上检测HBsAg和抗HBs，采用仪器自动加盖、不加盖温育以及人工温箱温育3种模式，比较结果间差异。 结果：3种不同温育模式之间HBsAg S/CO值差异均有统计学意义（P<0.01)；仪器加盖与不加盖温育模式抗HBs结果差异无统计学意义(P=1.000)，但两种仪器温育模式与人工温箱温育模式相比，结果差异均有统计学意义（P<0.01)。加盖与不加盖对不同浓度抗HBs检测结果无影响。对高浓度阳性和阴性HBsAg标本检测结果无影响，但对cut off值附近临界浓度HBsAg标本影响较大，不加盖温育模式出现假阳性结果。 结论：全自动酶免分析系统温育是关键环节，检测时应采用加盖温育模式。

摘要:摘要:目的:比较骨髓细胞形态学(BMA)和流式细胞术(FCM)诊断非霍奇金淋巴瘤（NHL）患者骨髓侵犯的临床价值。 方法：回顾性分析本院在2013～2014年间收治的207例NHL患者的骨髓涂片及流式细胞免疫表型的检测结果, 分析2种检测方法在不同程度、不同形态淋巴瘤骨髓侵犯的临床价值。 结果：经2种方法联合检测，总体阳性率为24.6%（51/207）。BMA和FCM的骨髓侵犯阳性率分别为17.4%(36/207)和22.2%(46/207)；其中阳性结果一致者29例，主要表现于高比例瘤细胞骨髓侵犯的病例；不一致36例多见于低比例瘤细胞骨髓侵犯的病例（17.4%），16例FCM检测为阳性而BMA为阴性的病例主要为轻度异形小细胞淋巴瘤，8例BMA阳性而FCM为阴性的病例为高度异形大细胞淋巴瘤。 结论：BMA、FCM在诊断不同形态淋巴瘤细胞侵犯的敏感性不同，FCM诊断轻度异形细胞淋巴瘤骨髓侵犯的敏感性高于BMA, BMA检测高度异型大细胞淋巴瘤骨髓侵犯优于FCM，两者联合检测可提高骨髓侵犯的阳性率。

摘要:摘要：目的：探讨强直性脊柱炎（ankylosing spondylitis，AS）中调节性B细胞（regulatory B cells，Breg）的水平及与疾病活动度间的关系。 方法：选取确诊AS患者38例，按BASDAI评分分为活动期21例和非活动期17例，同时选取30例健康人对照者，AS患者与对照组间一般资料差异无统计学意义。ASDAS-CRP和BASDAI评分作为疾病活动度评价指标。用流式细胞术检测AS患者外周血CD19+CD24^hiCD38^hiBreg、CD19+CD24^hiCD27+Breg、CD4+CD25^highTreg及CD3+IL-17+CD8-T_H17比例，荧光定量PCR检测RORγt和Foxp3 mRNA表达水平。 结果: AS患者CD19+CD24^hiCD38^hiBreg比例为（2.10±0.16）%，显著低于对照组（3.44±0.80）%，其中活动期患者［（1.88±0.66）%］低于非活动期患者［（2.36±0.57）%］，均低于对照组，差异均有统计学意义。AS患者CD19+CD24^hiCD38^hiBreg与Foxp3 mRNA成显著正相关性（r=0.369，P＜0.05），与T_H17、RORγt mRNA、BASDAI评分及ASDAS-CRP负相关（r分别为－0.338、－0.661、－0.411、－0.714，P均＜0.05），而与Treg无相关性（r=－0.006，P＞0.05）。而AS患者中CD19+CD24^hiCD27+ Breg亚群比例与对照组间差异则无统计学意义，但活动期患者比例有所降低，与非活动期患者及对照组比较，差异有统计学意义。AS患者中CD19+CD24^hiCD27^hiBreg亚群比例与Foxp3 mRNA正相关（r=0.344，P＜0.05），与ASDAS-CRP负相关（r=－0.383，P＜0.05），但与T_H17、Treg、RORγt mRNA及BASDAI评分均无显著相关性。 结论：AS患者中存在异常的Breg表型主要为CD19+CD24^hiCD38^hiBreg，其在AS患者中显著降低，并与疾病活动度密切相关，且与RORγt 和Foxp3 mRNA水平及T_H17数量存在一定的关联。

摘要:摘要：目的：检测急性缺血性脑卒中（IS）患者血清miR-106b-5p表达水平，探讨其作为IS分子诊断指标的可行性。 方法：用miRNA表达谱芯片筛选4例急性IS及10例健康体检者（NC）血清中差异表达的miRNAs。用实时荧光定量PCR法检测53例急性IS患者及50例NC血清中miR-106b-5p的含量。通过分析受试者工作特征曲线（ROC）判断miR-106b-5p在急性IS诊断中的敏感性和特异性。 结果：IS组患者血清miR-106b-5p含量（67.13±4.13）fmol/L高于NC组（40.48±2.62）fmol/L，差异有统计学意义（t=5.41，P<0.01）。miR-106b-5p诊断急性IS的ROC曲线下面积为0.78（95% CI：0.69 ~ 0.87）。当cut off值为40 fmol/L时，miR-106b-5p诊断急性IS的敏感性为79.25％，特异性为64.71％。 结论：miR-106b-5p在IS患者血清中表达水平升高，与临床症状结合可提高诊断的准确性。

摘要:摘要:目的：探讨急性胰腺炎（AP）患者中性粒细胞CD64（nCD64）水平与病变程度的关系。 方法：收集2015年1~5月南京大学医学院附属金陵医院住院的AP患者样本65例，根据急性生理和慢性健康评估评分（APACHEⅡ）、Ranson评分和CT分级等分为重度急性胰腺炎组（SAP，n=45）和轻度急性胰腺炎组（MAP，n=20）；以30 例健康体检者为健康对照组。用流式细胞术分别检测nCD64、C反应蛋白（CRP）和IL 6水平；受试者工作特征曲线（ROC）评估nCD64对AP和SAP的诊断效能；采用单因素相关分析和多元线性回归分析nCD64与CRP、IL-6、APACHEⅡ评分的关系。 结果：SAP组和MAP组nCD64 水平均较健康对照组明显升高（P均<0.01），且SAP组高于MAP组（P<0.01）；nCD64鉴别AP和健康对照者的曲线下面积（AUC^ROC）为0.944（95% CI: 0.901~0.987, P<0.01），鉴别SAP和MAP的AUC^ROC为0.925（95% CI: 0.855~0.995, P<0.01)，均优于APACHEⅡ评分、CRP和IL-6。AP患者nCD64水平分别与APACHEⅡ评分（r=0.382，P=0.002）、CRP（r=0.656，P<0.01）和IL-6(r=0.265，P=0.036)呈正相关。多元线性回归分析显示nCD64决定了14.3%APACHEⅡ评分的变化（β=0.398，P=0.002；r²= 0.143）；CRP决定了40.7% nCD64水平（β=0.638，P=0.000； r²=0.407）。 结论：AP患者nCD64水平明显升高，并与AP的严重程度相关，是潜在的AP病情评估的有效指标。

摘要:摘要：目的：探讨本地区出现的头孢菌素敏感型铜绿假单胞菌对碳青霉烯类药物中低度耐药的原因。 方法：收集对头孢他啶和头孢吡肟敏感、对碳青霉烯类药物中低度耐药的铜绿假单胞菌临床分离株，十二烷基磺酸钠 聚丙酰胺凝胶电泳(SDS-PAGE)观察铜绿假单胞菌相对分子量（Mr）为46 000的外膜蛋白OprD的改变。实时荧光定量RT-PCR分析细菌外排系统基因mexA、mexC、mexE和mexX表达情况。PCR扩增oprD基因和外排系统表达调控基因（mexZ、mexR、nalC、nalD和nfxB）并进行测序分析。 结果：30株分离菌有26株细菌外膜蛋白在Mr 46 000处有缺失或者减少；根据外膜蛋白表型选择30株细菌中的10株进行基因测序，发现碱基缺失和插入导致移码突变以及碱基的置换导致蛋白质合成的改变。外排系统基因以mexA和mexX过度表达为主，同时伴有少量mexC基因的过度表达。mexA的调控基因主要发生nalC Tyr23→His（TAC→CAC）和mexR Val 26→Glu（GTG→GAG），mexX的调控基因mexZ发生Pro136→Ala（CCA→GCA）的突变。 结论：该表型铜绿假单胞菌存在由oprD基因置换、缺失以及插入导致的外膜蛋白减少或缺失，nalC、mexZ调控基因突变引起外排系统mexAB OprM和mexXY OprM表达增加，可能是共同引起头孢菌素敏感型铜绿假单胞菌对碳青酶烯类药物中低度耐药的重要原因。

摘要:摘要:目的：探讨血清代替血浆检测SEPT9基因甲基化在结直肠癌(CRC)诊断中的价值。 方法：收集70例CRC患者、38例腺瘤或息肉患者及15例其他肠道疾病患者血清样本。用Epi proColon 2.0试剂盒进行SEPT9基因甲基化检测，依据肠镜病理诊断进行验证，比较SEPT9、癌胚抗原（CEA）和粪便潜血试验(FOBT)的敏感性和特异性，并进行统计学分析。 结果：CRC患者血清SEPT9的阳性率（81.4%）明显高于对照组（13.2%），差异有统计学意义（χ²＝92.814，P<0.01）。CRC患者血清SEPT9的敏感性为81.4%（95％CI：72.4%～90.4%）、特异性为86.7%（95%CI：72.4%～100%）。临床分期为Ⅰ期的CRC患者SEPT9阳性率为42.9%，Ⅱ期为88.9%，Ⅲ期为82.4%，Ⅳ期为100%，差异有统计学意义（χ²＝6.572，P<0.01）。SEPT9的ROC曲线下面积(AUC^ROC)为0.841，明显高于CEA（0.716）和FOBT（0.792）。3者联合检测(AUC^ROC可达0.935。 结论：血清SEPT9基因甲基化的检测是早期诊断CRC的有效方法，联合检测CEA及FOBT可以提高诊断效能。

摘要:摘要：目的：探讨血小板参数在缺血性眼病（IOP）中的临床意义。 方法：选取116例确诊为IOP的患者，包括非动脉炎性缺血性视神经病变（NAION）68例、视网膜动脉阻塞（RAO）27例和眼缺血综合征（IOS）21例。同时以年龄、性别与实验各组患者一比一配对，选取116例健康体检者作为对照组。测定血小板总数（PLT）、平均血小板体积（MPV）、血小板比容（PCT） 和血小板体积分布宽度（PDW）。 结果：NAION、RAO、IOS组MPV、PCT和PDW显著高于对照组，差异均具有统计学意义（P均<0.05）；PLT略低于对照组，但两组间PLT比较差异无统计学意义（P>0.05）。其中，MPV、PCT和PDW的异常率分别为73.3%、9.1%和34.2%。 结论：血小板参数中MPV、PDW、PCT，尤其是MPV的变化，对IOP具有一定的临床指导价值。

摘要:摘要：目的：探讨2型糖尿病（T2DM）患者血清铁蛋白（SF）水平与糖尿病视网膜病变(DR)的关系。 方法：选择2型糖尿病(T2DM)患者154例，分为无糖尿病视网膜病变(NDR)组68例、非增生性糖尿病视网膜病变(NPDR)组51例、增生性糖尿病视网膜病变(PDR)组35例，另选取体检健康者42例为健康人对照（NC）组。用化学发光法检测SF水平，ELISA检测血清血管内皮生长因子（VEGF）水平，同时收集相关临床资料。 结果：SF水平在NC组、NDR组、NPDR组及PDR组中依次增高，组间及组内比较差异均有统计学意义（P＜0.01）；秩相关分析中，T2DM患者SF水平与年龄(r=0.169）、糖化血红蛋白A1c（HbA1c）(r=0.176）、胰岛素抵抗指数（HOMA-IR）(r=0.163）、C反应蛋白（CRP）(r=0.199）及VEGF(r=0.277）呈正相关（P＜0.05或0.01），多元线性回归模型中，SF与CRP(β=0.189，P=0.023)及VEGF(β=0.314，P＜0.01)呈独立正相关；logistic回归分析显示，SF(OR=1.035, 95%CI=1.021~1.048，P＜0.01)是DR的独立危险因素之一。 结论：SF水平〖JP2〗在DR患者中呈高表达，是DR的独立危险因素，其可能主要通过与VEGF及炎性因子相互作用参与DR的发生与发展。

摘要:摘要：目的：探讨非小细胞肺癌（NSCLC）患者围手术期外周血T细胞程序性死亡分子1/配体(PD-L1/PD-1)的表达水平及其临床意义。 方法：收集60例NSCLC患者手术前后及60例健康体检者外周血标本，流式细胞仪检测外周血T细胞CD4+PD-L1+ 、CD8+PD-L1+ 、CD4+PD-1+、CD8+PD-1+的百分比。 结果：NSCLC患者术前与健康对照组CD4+PD-L1+、CD8+PD-L1+、CD4+PD-1+、CD8+PD-1+T细胞的百分比（%）分别为（7.14±1.69 vs 4.99±1.14）、（4.56±0.40 vs 1.48±1.08）、（17.21±2.70 vs 14.30±2.92）、(13.31±3.16 vs 8.38±2.11)，差异均有统计学意义（P均＜0.05）。术后外周血NSCLC患者CD4+PD-L1+、CD8+PD-L1+、CD4+PD-1+、CD8+PD-1+T细胞的百分比(%)依次为（5.86±1.54）、（3.58±0.52）、（13.38±2.17）、（11.48±2.61）,与术前比较均降低，差异均有统计学意义（P均＜0.05）；且CD4+PD-L1+、CD8+PD-L1+、CD8+PD-1高于健康对照组（P均＜0.05）。 结论：外周血T细胞中PD-L1/PD-1百分比与NSCLC进展有关，检测PD-L1/PD-1对NSCLC的诊疗和预后监测有一定的帮助。

摘要:摘要：多发性骨髓瘤（MM）是浆细胞异常增殖的恶性肿瘤，目前仍未找到治愈的方法。MM细胞的增殖、迁移及耐药与信号通路转导有关。研究发现，微小RNA（MicroRNA，miRNA）在MM中表达异常，并且对信号通路和抑癌基因起重要的调控作用。因此，miRNA被认为是新型的生物学标志物和潜在的治疗靶点。近年来，对于MM中miRNA的表达水平及相关机制的研究众多，本文就目前MM中miRNA参与调控的信号通路以及miRNA靶向结合的mRNA作一综述。

摘要:摘要：细胞凋亡是指由基因控制的细胞程序性死亡，其参与机体正常发育及内环境稳态的维持，而钙敏感受体（Calcium Sensing receptor, CaSR）在细胞凋亡过程中发挥重要作用。近年来，CaSR与细胞凋亡关系的研究在多种临床疾病中得到展开。本文通过介绍细胞凋亡的3条主要信号转导通路阐述了细胞凋亡的发生机制，并对近些年来在不同疾病中CaSR与细胞凋亡关系的研究进展作一叙述，以期为相关疾病的诊断与治疗提供新的思路。

摘要:摘要：宫颈癌是女性最常见的妇科恶性肿瘤，随着流行病学等因素的改变，对宫颈癌的筛查及随访策略提出了更高的要求。细胞周期抑制蛋白p16^INK4a作为近年来发现的宫颈癌标志物，多种方法检测在在宫颈癌组织中高表达。多项研究结果表明：对不同方法的p16^INK4a检测可为宫颈癌的筛查策略的制定提供新思路。不同类型标本的p16^INK4a免疫化学染色有助于优化宫颈癌的诊断及随访。

摘要:摘要：目的：探讨实验室光强度（简称“光强”）对Doumas血清总胆红素参考方法测量的影响。 方法：收集高、中、低3个浓度水平的总胆红素新鲜混合血清样本。将样本在A~F共6种不同的实验室光强下分别放置2 h。其中，A为完全避光,即实验室避光的极限条件；B~F 光强为常见的各种实验室光强。采用Doumas血清总胆红素参考测量程序测量每一浓度水平样本，每份样本重复2次。同时测量国际参考实验室外部质量评估的RELA-A样本作为正确度质控样本。以A光强下测量结果均值为基准值，计算B~F光强下测量结果均值与A光强下测量结果均值的相对偏移。 结果：低值样本B~F光强下测量结果均值与A光强下测量结果均值的相对偏移分别为-0.81%、-2.90%、-9.52%、-7.59%、-11.79%；中值样本B~F光强下测量结果均值与A光强下测量结果均值的相对偏移分别为-1.00%、-1.96%、-3.49%、-7.51%、-10.34%；高值样本B~F光强下测量结果均值与A光强下测量结果均值的相对偏移分别为+0.26%、-0.74%、-0.93%、-4.04%、-6.15%。 结论：光强对不同浓度的血清总胆红素样本测量均有明显影响，且影响程度不一致，在用Doumas参考测量程序进行血清总胆红素测量时，应严格避光。在B~F 5种常见实验室光强中，宜选用B“关闭普通窗帘和避光窗帘，关闭两盏日光灯”光强［（0.09~0.13）Lux］条件。

摘要:摘要：目的：总结TPMT基因型在中国人群中的分布，为硫嘌呤类药物的个体化用药提供参考。 方法：通过系统检索PubMed、Embase和CBM数据库中（截止到2015年4月10日）有关TPMT基因型在中国人群中分布的研究文献，对TPMT基因型和等位基因在中国人群中的分布做一整理归纳。检索词分别为“硫嘌呤甲基转移酶”，“TPMT”，“thiopurine S methyltranferase”，“polymorphism”，“hepalotype”等。 结果：共有30篇中文文献和14篇英文文献关于TPMT基因型在中国人群中的分布，共纳入10 458人。中国人群中TPMT基因型总体变异率为2.91%（304/10 458），最常见的变异基因型为TPMT*1/*3C(96.71%，294/304)。TPMT*1/*3A基因型主要出现在哈萨克斯坦族和维吾尔族人群中，TPMT*1/*6和TPMT*1/*2基因型在中国人群极少出现；主要的变异等位基因为TPMT*3C，占总体变异等位基因的97.05%（296/305）。 结论：根据我国不同地区和民族选择性进行TPMT基因型检测，不但可有效的指导硫嘌呤类药物的个体化用药，而且可节约医疗成本，减轻患者经济负担。

摘要:摘要：目的：统计Rh血型系统抗原中C、c、E、e在人群中的分布情况，分析临床常规检测Rh表型及其同型输注的必要性。 方法：采用血清学方法对19 061例输血患者和18 331例献血员样本进行Rh系统C、c、E、e和D 5种抗原表型分型，采用抗人球蛋白法对输血患者进行不规则抗体筛选及鉴定。 结果：RhD阳性人群主要以C、e抗原频率占优势，RhD阴性人群主要以c、e抗原占优势；在检出26例同种抗体中，Rh血型系统23例，占88.5%，其中，抗E 18例、抗e 2例、抗C 1例、抗D 1例、抗Ce 1例。 结论：掌握人群中Rh血型系统抗原表型分布情况，及时提供Rh表型相合血液，可在一定程度上防止和减少高频抗体的产生，有利于降低患者输血不良反应的发生率。

摘要:摘要：目的：鉴定1例孕期筛查出的异常血红蛋白。 方法：高效液相色谱法(HPLC)筛查出异常血红蛋白，然后进行地中海贫血基因分析和DNA测序，同时用毛细管电泳法进行对比实验。 结果：DNA测序结果显示为Hb Matera，HPLC和毛细管电泳法分析结果分别为HbA0 47.3%、HbA2 41.2%、HbF 0.7%和HbA 60.1%、HbA2 3.0%、可疑HbG 36.9%。 结论：Hb Matera的发现，丰富了中国人群血红蛋白基因突变种类，对遗传咨询具有重要意义。

摘要: