摘要:摘要:目的建 立临床适用的神经纤维瘤病(NF)的分子遗传分析方法,对NF进行分子遺传诊断和遗传咨询,并对NF家庭进 行产前诊断。方法 以南京医科大学附属妇产医院遗传咨询门诊收治的18 例NF患者为研究对象,收集患者及其家属的外 周血标本并提取基因组DNA,应用lon Torrent半导体测序技术进行NF1/NF2基因测序并结合多重连接探针扩增反应(ML- PA)检测,筛选致病突变并用Sanger测序验证,结合亲子二代的分子遗传检测结果,制定适当的临床干预和随访计划。在NF 家系母亲再次妊娠时,对胎儿进行产前诊断。结果应用 lon Torrent半导体测序技术检测出9例致病突变和1例可疑致病突 变,其中包括3个未报道过的新突变;应用MLPA技术检测出1例拷贝数大片段缺失。对其中5个家系的孕妇行羊膜腔穿刺 术抽取羊水进行产前诊断,其胎儿均不携带家系的致病突变。结论基于 lon Torent半导体测序及MLPA技术建立的基因诊 断方法可为NF临床诊断及遗传咨询提供分子遗传学依据,具有较高的临床应用价值。

摘要:摘要:目的探讨 MicroRNA-1184( miR-1184)在胃癌细胞系中的表达水平及其对胃癌细胞增殖、迁移、细胞周期及凋亡等生物学行为中的作用。方法通过实时荧光定量 PCR检测胃癌组织及人胃黏膜上皮细胞系GES-1中miR-1184的表达水平;通过 CCK-8试验、平板克隆形成试验、Transwell迁移试验及细胞划痕试验检测胃癌细胞的增殖和迁移能力;通过流式细胞术检测胃癌细胞系的细胞周期及凋亡率的变化;通过Western blot 检测胃癌细胞上皮-间质转化( EMT)、细胞周期和细胞凋亡相关蛋白的表达水平;通过双荧光素酶报告基因试验检测miR-1184与异柠檬酸脱氢酶3(NAD+)a( IDH3A)的靶向关系。结果与胃癌旁组织及人胃黏膜上皮细胞GES-1相比,miR-1184在胃癌组织中呈低表达(t=2.54,P<0.05),且在胃癌细胞系BGC-823 和 MGC-803中呈低表达(t= 13.99,P<0.001;t= 14.85,P<0.01)。与对照组相比,转染miR-1184抑制剂可促进胃癌细胞的增殖(t=9.28, P<0.05)、迁移(t=9.24, P<0.001). EMT进程,G,/S期细胞周期转换以及细胞凋亡减少(t=6.57,P<0.01);转染 miR-1184模拟物可抑制胃癌细胞的增殖(t=7.34 ,P<0.001)、迁移(t=9.24,P<0.001)、EMT进程、G,/S期细胞周期转换以及细胞凋亡增加(t= 20.33 ,P<0.000 1) ;miR-1184可与IDH3A靶向结合,其抑制剂可使胃癌细胞中IDH3A蛋白的表达量增加(t=11.32 ,P<0.001),而其模拟物可使胃癌细胞中IDH3A蛋白的表达量减少(t=20.91,P<0.0001)。结论miR-1184 在胃癌组织和细胞系中呈低表达,可影响胃癌细胞增殖、迁移EMT进程、细胞周期G,/S期转换及细胞凋亡等生物学行为。

摘要:摘要:目的检测利奈唑胺不敏感革兰阳性球菌对新型噫唑烷酮类抗菌药物特地唑胺的敏感性，并探讨特地唑胺不敏感菌株 的耐药机制。方法收集临床分离非重复革兰阳性球菌 170株,包括利奈唑胺耐药头状葡萄球菌46株、利奈唑胺敏感头状葡 萄球菌19株、利奈唑胺不敏感肠球菌55株、利奈唑胺敏感肠球菌12株、甲氧西林耐药金黄色葡萄球菌19株、甲氧西林敏感 金黄色葡萄球菌18株、利奈唑胺耐药金黄色葡萄球菌1株。采用微量肉汤稀释法检测所有菌株对特地唑胺和利奈唑胺的最 小抑茵浓度(MIC),并比较两种药物的抗菌活性。采用PCR结合Sanger测序技术分析特地唑胺不敏感革兰阳性球茵fr、optrA 基因携带情况及23S rRNA V区突变。结果利奈唑胺耐药头状葡萄球茵(MICg0>256 μg/mL)对特地唑胺的MIC 值为4~ 32 ug/mL; 利奈唑胺不敏感肠球菌(MIC值4~ 16 μg/mL)中,特地唑胺的敏感率为10.% ,其MIC值为0.5~2 μg/mL;1株利奈 唑胺耐药金黄色葡萄球菌对特地唑胺敏感，MIC值为0.5μg/mL。特地唑胺对利奈唑胺敏感的金黄色葡萄球茵和肠球茵的 MIC值均为0.5 μg/mL,对利奈唑胺敏感头状葡萄球菌的MIC值为0. 125 μg/mL。耐药基因分析显示，特地唑胺耐药头状葡萄 球菌gfr基因携带率为87.0%(40/46) ,23S rRNA V区G2576T的突变率为100% ;特地唑胺不敏感肠球菌optrA 基因携带率为 85.7% (42/49) ,显著高于特地唑胺敏感株的22.2%( P<0.001);1株利奈唑胺耐药特地唑胺敏感的金黄色葡萄球菌携帶cfr基 因。结论对于利奈唑胺不敏感的革兰阳性球菌,特地唑胺的抗茵活性是利奈唑胺的8~32倍,其耐药机制可能与携带optrA 基因及23S rRNA V区G2576T突变有关。

摘要:摘要:目的检测 并分析慢性肾脏病( chronie kidney disease, CKD)患者治疗前、连续治疗不同随访时间点血清miR-30a-5p和miR-196a-5p水平动态变化.探讨其作为CKD患者辅助诊断及疗效监测分子标志物的价值。方法收集江苏省中 医院肾内科2015年4月至2016年2月就诊的20例CKD患者治疗前以及连续治疗并随访3~6个月的血清标本，记录患者血生化及尿液指标,同时收集23例体检健康者血清标本作为对照。采用实时荧光定量PCR检测各组血清miR-30a-5p 和miR-196a-5p 水平。采用非参数检验、Spearman秩相关分析血清miR-30a-5p和miR-196a-5p的水平变化及临床应用价值。结果与健康人对照相比,CKD患者治疗前血清miR-30a-5p[ 0.563(0.324,1.737) vs 0.270( 0.127 ,0.435) , U= 100.5, P= 0.004]和miR-196a-5p[0.423(0.154, 1.270) vs 0.121(0.056 ,0.168), U=74, P=0.000 3]水平显著升高。与CKD患者治疗前相比,CKD患者血清miR-30a-5p和miR-196a-5p水平从治疗后第3个月开始呈持续降低趋势,至第6个月，其miR-30a-5p[ 0.344(0.128, 0.672) vs0.563(0.324, 1.737) ,P=0.020]，miR-196a-5p[ 0.227( 0.079 ,0.474) vs 0.423(0.154,1.270) ,P=0.030]水平与治疗前比较差异有统计学意义。Speamman 相关性分析显示,血清miR-30a-5p和miR-196a-5p水平与估算的肾小球滤过率(eGFR)呈显著负相关(r=-0.223,P= 0.013;r=-0.191,P=0.035)。结论CKD 患者血清miR-30a-5p和miR-196a-5p水平检测有助于反映肾脏功能,具备成为CKD患者辅助诊断及疗效监测分子标志物的潜能。

摘要:摘要:目的对1 个Danon病家系进行基因突变检测,并对该家系中的1例高危胎儿进行产前诊断。方法采集该家 系先证者和其他家庭成员的外周血标本,利用Sanger测序检测该家系其他成员是否存在先证者的溶酶体相关膜蛋白2(LAMP2)基因 突变(c.257_ 258delCC)。获得胎儿母亲基因检测结果后采集羊水标本,并对高危胎儿进行产前诊断。结果该家系多 名成员存在LAMP2基因c.257_ _258delCC突变,胎儿携带与先证者相同的LAMP2基因e.257_ 258delCC 突变。结论利用Sanger测序技术可对Danon病家系进行分子诊断,并成功对1例胎儿进行了产前诊断。

摘要:摘要:目的探讨造 血细胞特异性蛋白1(HS-1)相关蛋白X-1(HAX-1)对宫颈癌Hela细胞增殖的调控作用。方法以人宫颈.癌Hela细胞系为研究模型,采用脂质体介导法将HAX-1siRNAs和阴性对照siRNA转染Hela细胞并构建HAX-1沉跌细胞系 (HAX-1沉默组),以HAX-1高表达质粒和peDNA3.1空载质粒转染Hela 细胞并构建HAX-1过表达细胞系(HAX-1过表达组)。采用实时荧光定量PCR (RT-qPCR)和Western blot检测转染后Hela 细胞中HAX-1的表达情况;EdU试验检测转染后的 细胞增殖能力;MTT试验检测转染后的细胞活力;流式细胞术检测HAX-1对转染后Hela细胞周期和细胞凋亡的变化;RT-qPCR检测转染后Ki-67、c-Myc. .BCL-2/BAX 基因的表达水平。结果沉跌 HAX-1后,Hela细胞中HAX-I mRNA和蛋白质的 水平显著降低,而过表达HAX-1后,Hela细胞中HAX-I mRNA和蛋白质的水平显著升高,差异均有统计学意义( P<0.05)。过表达HAX-1后,HAX-1过表达组中EdU阳性细胞数目下降,细胞活力降低,G,期细胞比例增加,S期细胞比例降低,细胞凋亡 率上升,增殖相关基因Ki67表达降低, BCL-2/BAX基因显著降低(P<0.05),而HAX-1沉默组则具有相反的表现。结论HAX-1的表达抑制了Hela 细胞增殖,并通过BCL-2/BAX途径诱导其凋亡。

摘要:摘要:目的对3 例NROBI基因突变所致的先天性肾上腺发育不全( adrenal hypoplasia congenital, AHC) 患者进行分子诊断，以探讨其致病机制并为患者提供遗传咨询。方法采集3例 AHC患者及其家系成员的外周血标本并提取DNA,通过PCR结合Sanger测序对患者的NROBI基因进行测序分析。结果在3例 AHC患者DNA标本中分别检出NROBI基因c.676delG、e.509_ 572dup、c.409G>T半合子突变,并证实均遗传自其母亲。结论检出 的c.676delG和c.509_ 572dup 为未报道的新突变，可判为致病突变,扩展了NROBI基因突变谱系。

摘要:摘要:HBV核心启动子在病毒的复制和衣壳组装中起关键作用，深入了解其基本结构及功能,影响转录活性的因素及存在的突变类型,有利于进一步认识HBV复制及感染的进程并为慢性乙型肝炎的诊治提供新思路。在此基础上，通过检测HBV核心启动子区的突变位点也有助于预测HBV感染的结局以及治疗效果。该文就HBV核心启动子及其突变的相关研究进展作一综述。

摘要:摘要:人类基因组结构变异在人类多样性和疾病发生中起着重要作用,许多遗传病都是由染色体结构变异所致。目前临床上对于结构变异检测主要有染色体核型分析、荧光原位杂交等细胞遗传学方法以及拷贝数变异微阵列芯片和拷贝数变异高通量测序等分子遗传学方法等。该文旨在介绍几种人类基因组结构变异检测方法在临床上的应用进展,分析其局限性,并对未 来结构变异的临床检测方向进行了展望。

摘要:摘要:新型冠状病毒( SARS-CoV-2)全球流行,快速有效的检测方法对于疫情防控和患者救治极为重要。目前已有多种方法应.用于SARS-CoV-2的检测,但均存在一定的局限性。研究发现,采用CRISPR/Cas系统构建的SARS-CoV-2检测方法具有快速、便捷的优势。目前应用于SARS-CoV-2检测的CRISPR/Cas系统主要包括CRISPR/Cas9. CRISPR/Cas12和CRISPR/Cas13,多以SARS-CoV-2的核酸和蛋白质作为检测靶标。因此,该文对基于CRISPR/Cas系统的SARS-CoV-2检测方法分别从核酸和蛋白质2个角度进行综述,并就各自的优缺点及未来发展趋势进行分析，期望为CRISPR/Cas系统在传染病检测中的应用提供参考。

摘要:摘要:目的评估 瓣膜宏基因组二代测序( metagenomie next generation sequeneing, mNGS) 对感染性心内膜炎( infective endocar-ditis, IE)的病原学诊断价值。方法收集于2022 年6月1日至11月30日在南京医科大学附属南京医院接受瓣膜手术患者25例，根据改良杜克标准确诊为IE患者20例,非IE患者5例。采集各患者的静脉血及瓣膜组织标本，同时进行血培养、瓣膜培养以及瓣膜mNGS检测,并进一步比较mNGS和传统诊断方法(血培养、瓣膜培养)诊断IE病原学的临床效能。结果在20例经病理诊断为IE的患者中,血培养阳性8例，瓣膜培养阳性3例,瓣膜mNGS阳性19例;血培养、瓣膜培养和瓣膜mNGS诊断IE的敏感性分别为40%、15%和95%。瓣膜mNGS与血培养或瓣膜培养的检测结果在细菌的属水平上相一致。瓣膜mNGS的属相对丰度(P=0.001)、种序列数(P=0.028)、覆盖率(P=0.003)与抗生素的使用时间有关。瓣膜mNGS可以指导培养阴性IE患者的抗生素治疗。结论瓣膜 mNGS对IE的病原学诊断具有较高的临床价值,为后续患者的抗生素治疗提供了依据。

摘要:摘要:目的探讨辣椒素 受体( TRPV1)及瞬时性受体电位通道香草酸受体4(TRPV4)与癌胚抗原相关细胞黏附分子6(CEACAM6)共表达对结直肠癌(CRC)患者预后的影响。方法使用GEPIA交互分析软件根据基因表达中值将620例CRC患者分为高表达和低表达两组(中值1例不入组),以设定阈值对TCGA和GTEX数据库中TRPVI和TRPV4基因的表达量进行log2(TPM+1)转换及差异分析,采用Wilcoxon检验分析TRPVI/TRPV4和CEACAM6基因共表达与CRC患者总体生存期(0S)的关系,采用基因组数据分析及免疫组化染色法对上述结果进行验证。结果CRC 患者癌组织中TRPV1的表达量显著低于癌旁组织( 1.70+0.51 vs 3. 10+0.46,t=-53.56 ,P<0.01),而TRPV4显著高于癌旁组织( 1.47+0.78 vs 0.67+0.33,t= 25.98,P<0.01)。TRPVI 和CEACAM6双高表达组CRC患者的OS显著高于CEACAM6单高表达患者(中位0S:6.8年vs5.5年,log-rank P=0.0479)。 结论检测 TRPV1及TRPV4水平可有效评估CEACAM6高表达CRC患者的预后。

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摘要:摘要:目的通过 实验室信息管理系统( laboratory infomation management system, LIS)和检测平台的信息交互，优化检测流程，缩短乙肝表面抗原定量检测实验室内报告周转时间(TAT),降低试剂成本,并评价该方案风险及临床价值。方法通过 LIs实现待检样本与患者历史检测结果比较,在检测前自动判断当前样本是否需要进行稀释,并发送特定检测指令指导检测平台.进行检测。比较该方案上线前后该项目实验室内TAT、试剂消耗等指标,并通过检测高浓度样本评估样本的漏检风险。结果优化方案上线5个月后,共计使用优化方案检测样本1508例,误判29例,其中3例需稀释后检测,误判率为1.92% ,实际节约试剂1 476人份。未使用该方案检测的样本实验室内TAT中位数为79.88( 76.66~83.10) min, 应用该方案进行检测的样本 实验室内TAT中位数为67.18( 63.16-71.21) min, 平均缩短时长超过12 min(t=6.089,P<0.05),当乙肝表面抗原浓度低于1x10 IU/mL时,不会由于钩状效应而导致检测结果低于检测限。结论该方 案可明显缩短该项目的实验室内TAT,降低检测 成本,具有较大发展空间和潜力,值得推广和应用。

摘要:摘要:甲状腺癌B超引导下细针穿刺细胞学病理诊断后,利用剩余液基细胞进行分子病理v-raf鼠肉瘤病毒癌基因(v-raf mu-rinesarcomavimaloncogene，BRAF)V600E突变检测以进行辅助诊断。该文分析了临床甲状腺穿刺进行细胞和分子病理诊断中遇到的若干问题,探讨发生的原因，给出解决问题的参考答案,对临床病理、内分泌和普外科医生都具有重要的参考价值。

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